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mRNA加帽率检测服务:

根据世卫组织(WHO)、美国药典(USP)、中国国家药品监督管理局药品评审中心(CDE, NMPA)发布的mRNA药学相关指南/指导原则,加帽率是mRNA的关键质量属性(CQA)。因此,我们需建立合适的分析方法对mRNA加帽率进行表征,以满足临床前或临床用mRNA的质量要求。

青鸟核酸(RNASci)提供全流程的mRNA加帽率检测方案,包括寡核苷酸夹板(即探针)设计、RNase H切割、离子对反相色谱-质谱(IP-RP-LC-MS)和数据分析。

样品类型 青鸟核酸定制化服务
场景1 客户提供全长mRNA样品 探针设计+RNase H切割+LC-MS谱图+数据分析
场景2 客户提供全长mRNA样品和探针 RNase H切割+LC-MS谱图+数据分析
场景3 客户提供酶切后的5’端寡核苷酸片段 LC-MS谱图+数据分析

mRNA 加帽率检测原理:

长链编码RNA通常由成千上万个核苷酸(nt)组成,而加帽与未加帽的mRNA仅相差一个甲基化鸟苷(m7G),这一微小的差异导致其在全长mRNA中难以区分。
当前加帽率的检测思路为:通过酶切获得5’端RNA片段(长度约几十个核苷酸),随后通过液相色谱(HPLC)或液质联用(LC-MS)等方法分离不同长度的5’端寡核苷酸片段,从而定量评估mRNA的加帽率。

案例分享:

青鸟核酸建立了完善的mRNA加帽率分析方法,涵盖探针设计、RNase H酶切处理、液质联用(LC-MS)检测和数据处理。
我们制备了编码荧光素酶的mRNA(luciferase mRNA)并对其进行了加帽率检测,对LC-MS目标峰的解卷积分析显示,mRNA加帽率大于90%。

mRNA加帽率检测流程:

mRNA加帽率检测结果: