circRNA IVT模板设计：

环状mRNA（circRNA）的制备流程为：通过体外转录（IVT）反应得到线性RNA前体；在GTP的催化下，线性RNA发生自剪接环化，得到circRNA。
IVT是一种依赖于DNA模板的过程，常用的IVT模板类型是线性化质粒DNA或PCR产物。

质粒DNA模板：

质粒DNA模板的必要元件包括启动子序列、目标mRNA序列和线性化酶切位点。

     启动子序列：DNA序列中的启动子序列RNA聚合酶（RNAP）识别后，在RNAP作用下将DNA转录为RNA。来源于T7噬菌体的T7 RNA聚合酶具有较高的特异性和RNA合成活性，是最常用的RNA聚合酶。

      线性化酶切位点：使用限制性内切酶在目标基因的下游进行切割，能够避免RNA聚合酶的过度转录。IIS型限制性内切酶是理想的线性化内切酶，能够确保polyA的完整性，且不留下多余的核苷酸。

     线性RNA前体序列：含目标circRNA序列与RNA辅助环化元件。

用于IVT反应的质粒DNA模板的具体设计策略如下：

PCR模板:

PCR产物也是IVT RNA的常用模板，其关键组成元件包括启动子序列、以及与目标mRNA对应的模板序列。启动子序列的设计策略与质粒DNA模板一致。